kinetyka, Studia, Biochemia, Ćwiczenia

[ Pobierz całość w formacie PDF ]
Katarzyna
Sobolewska
BADANIE WŁASNOŚCI KINETYCZNYCH
INWERTAZY
27.11.2012 r.
Grupa I
1. Oznaczenie krzywej Somogyi – Nelsona
(wykonano 23.11.2012 r.)
1.1.
Tabela wyników
Stężenie [mmol/dm
3
]
A [1]
0,000
0,000
0,075
0,000
0,150
0,009
0,300
0,025
0,600
0,050
1,200
0,090
2,400
0,201
4,800
0,327
1.2.
Krzywa wzorcowa
Zależność absorbancji od stężenia glukozy
0,35
y=0,07158x
R
2
=0,9881
0,3
0,25
0,2
0,15
0,1
0,05
0
0
1
2
3
4
5
6
stężenie [mmol/dm3]
2. Badanie wpływu stężenia substratu na szybkość reakcji enzymatycznej na przykładzie
inwertazy drożdży- wyznaczanie stałej Michaelisa- Menten, szybkości maksymalnej,
wykreślanie krzywej Linewaevera- Burka
2.1. Wykonanie
Przygotowano odczynnik miedziowy poprzez zmieszanie 25 ml roztworu
węglanu/winianu z 1 ml roztworu CuSO
4
. Następnie w krótkich probówkach
przygotowano serię rozcieńczeń 1 ml roztworu sacharozy o następujących stężeniach:
125; 62,5; 31,25; 15,625; 0 mmol/dm
3
. Do każdej dodano po 500 μl buforu octanowego.
1
Do pięciu czystych probówek dodano po 200 μl odczynnika miedziowego.
Do probówki z 0 M roztworem sacharozy dodano 1 ml roztworu inwertazy i natychmiast
pobrano 200 μl i przeniesiono do 1 probówki zawierającej 200 μl odczynnika
miedziowego. Po 2 minutach pobrano kolejne 200 μl roztworu i przeniesiono do
kolejnej probówki zawierającej odczynnik miedziowy. W ten sposób pobrano 5 prób.
W przypadku innych rozcieńczeń postąpiono analogicznie.
Każdą serię probówek umieszczono we wrzącej łaźni wodnej na 15 minut. Po
ostudzeniu do każdej probówki dodano po 200 μl odczynnika arseno- molibdenowego,
całość intensywnie wymieszano i po około minucie dodano 5 ml wody destylowanej.
Zmierzono absorbancję względem wody otrzymanych roztworów przy długości fali λ=
520 nm.
2.2. Tabele wyników
a) Tabela zmierzonych absorbancji
Stężenie [mmol/dm
3
]
Czas [min]
0
15,625
31,25
62,5
125
Absorbancja [1]
0
0,000
0,000
0,000
0,000
0,000
2
0,010
0,252
0,069
0,080
0,127
4
0,040
0,039
0,108
0,155
0,241
6
0,115
0,084
0,166
0,227
0,338
8
0,012
0,08
0,228
0,287
0,370
Korzystając z krzywej Somogyi-Nelson'a wyznaczono stężenie glukozy w
roztworach.
y=0,07158x, czyli A=0,07158c
c
=
A
0,07158
[
mmol
dm
3
]
b) Tabela obliczonych stężeń glukozy
Stężenie sacharozy [mmol/dm
3
]
Czas [min]
0
15,625
31,25
62,5
125
Stężenie glukozy [mmol/dm
3
]
0
0,0000
0,0000
0,0000
0,0000
0,0000
2
0,1397
3,5205
0,9640
1,1176
1,7742
4
0,5588
0,5448
1,5088
2,1654
3,3669
6
1,6066
1,1735
2,3191
3,1713
4,7220
8
0,1676
1,1176
3,1852
4,0095
5,1690
2
2.3. Wykresy
a) Wykres 1.
Ze względu na bardzo dużą rozbieżność wyników w dalszych obliczeniach nie
uwzględniono tego wykresu i danych na nim zawartych.
b) Wykres 2.
3
c) Wykres 3.
d) Wykres 4.
4
e) Wykres 5.
f) Prędkości początkowe – odczytane z wykresów stycznych
Stężenie [mM]
V
0
[mM/min]
15,625
0,1993
31,25
0,4026
62,5
0,5861
125
1,0496
2.4. Wykres Lineweavera-Burka
a) Dane do wykresu
S
[
1
mM
=
dm
3
mmol
]
Prędkość początkowa
v
0
[
min
mM
]
1
1
Stężenie S [mM]
v
0
[mM/min]
15,625
0,06400
0,1993
5,0175614651
31,25
0,03200
0,4026
2,4838549429
62,5
0,01600
0,5861
1,7061934823
125
0,00800
1,0496
0,9527439024
b) Wykres
5
  [ Pobierz całość w formacie PDF ]
  • zanotowane.pl
  • doc.pisz.pl
  • pdf.pisz.pl
  • klobuckfatima.xlx.pl